哺乳动物稳定细胞系之构建策略

**ningxueqin** · 发表于 2022-6-11 20:14:15

　　我们想用哺乳动物细胞生产重组蛋白用于结构学研究时，首先想到的办法是将外源基因通过瞬时转染的方法转染到人胚胎肾293细胞（human embryonic kidney 293 cell，HEK293）中。稳定细胞系构建服务的HEK293能迅速及高产地表达外源基因，获得大量的外源蛋白（图1）。在进行转染操作时，质粒DNA的量需要超过1mg/L 。虽然研究者尝试着在保持高蛋白产量的同时减少质粒DNA的量，但当需要大量培养细胞时，质粒DNA的制备仍是一大障碍。因此，在设计实验时就应充分考虑这个问题。构建可稳定表达外源基因的重组细胞系是可替代蛋白瞬时表达的方法，其优势在于大大减少了对质粒的需求量；易于扩大培养；以及可通过建立冷冻细胞库而获得可长期使用的重组细胞系。而构建这种重组细胞系主要的不足之处在于耗时较长（图1）。正如图中展示的基因转移方法，目前表达蛋白质最佳的方法是构建一个稳定的细胞池，而不是构建一个克隆细胞系（图1）。本方法省去了单细胞克隆和细胞系筛选等步骤，这两个步骤正是构建细胞系中耗时最长的步骤。此外，我们还对构建细胞系和细胞池的最新进展进行了总结，并简要概述了哺乳动物细胞悬浮培养的方法和用于基因稳定表达的载体的设计方法。另外，有几篇综述介绍了已在哺乳动物细胞中通过稳定或瞬时基因表达获得的蛋白质的研究信息。

哺乳动物稳定细胞系之构建策略

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