人结肠癌细胞的培养步骤及注意事项

推广_d555faab5c · 发表于 2022-3-2 08:30:11

细胞介绍

细胞名称：　HT29/人结肠癌细胞

智立编码：20211259101419258

　　1964年，HT-29细胞系由J.Fogh用移植培养方法和含15%FBS的F12培养液从原发性肿瘤分离。近来，已建株的培养细胞用含血清McCoy’s5A培液培养。该细胞系在裸鼠中致瘤，也能在类固醇处理的地鼠中致瘤。

　　细胞特性

　　1）来源：结肠癌

　　2）形态：上皮细胞样，贴壁生长

　　3）含量：>1x106细胞数

　　4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

　　5)用途：仅供科研使用。

　　培养基及培养冻存条件准备：

　　1）准备McCOY's5A培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%.

　　注意事项：HT-29复苏后第一周可能会有大量漂浮细胞，可更换新鲜培养液，同时将漂浮的细胞离心收集后加回到培养瓶中与贴壁细胞共同培养。新复苏的细胞会以补丁形态三维接触生长（即不是单层扁平生长），待细胞分裂生长后将会变回上皮细胞形态单层扁平生长。

　　2)培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

　　3)冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

　细胞处理：

　　1）冻存细胞的复苏：

　　将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　运输和保存

　　干冰运输及复苏好存活细胞

　　（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

　　（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

　　细胞接收后的处理

　　1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

　　2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

　　3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

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人结肠癌细胞的培养步骤及注意事项

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