双特异性抗体平台ELISA试剂盒基础知识问答普及篇

359660243 · 发表于 2023-9-18 23:38:57

　　许多科研爱好者们在做ELISA试剂盒实验时总会碰到各种各样的问题，那么为了避免问题再次困扰到您的实验，今天双特异性抗体平台要为您介绍的是：ELISA试剂盒基础知识问答普及篇。
　　问题：ELISA加样时如何防错？
　　解决方案：
　　（1）用一张写满字的纸，字越多越好，比如报纸，垫在下面，这样，加过标本的小孔看过去下面的字会变小，没加的字正常，非常容易区分。
　　（2）可以利用液面反光与没有加的孔加以区别
　　（3）在标本加完后，再把加样枪全压下，使液面产生小气泡，可以区分
　　问题：如何正确使用酶结合物？
　　解决方案：
　　1.酶结合物的稀释液
　　在稀释液中常加入高浓度的无关蛋白质（例如1%BSA或5%脱脂奶粉），通过竞争抑制酶结合物在固相载体上的非特异性吸附。一般还加入能够抑制蛋白质吸附于塑料表面的非离子型表面活性剂，如吐温20（0.05%的浓度较为适宜）。
　　2.正确稀释酶结合物
　　酶结合物的合适工作浓度需要通过预实验来确定，浓度过高易导致本底偏高，浓度过低则会导致阳性信号的减弱。
　　酶结合物在使用前稀释，稀释后的酶结合物不宜长期保存，因为低浓度的酶结合物极易失活。
　　问题：血清如何避免沉淀物的产生？
　　解决方案：
　　1、解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法（-2O。C至4。C至室温），若血清解冻时改变的温度太大（如-20。C至37。C），实验显示非常容易产生沉淀物。
　　2、解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生
　　3、请勿将血清置于37。C太久。若在37。C放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。
　　4、血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。
　　5、若必须做血清的热灭活，请遵守56。C，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。 [5]血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理? 欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。但不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。

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