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ningxueqin 发表于 2023-4-19 13:27:09
ELISA试剂盒是干什么用的，抗体人源化又该怎么用呢？ELISA试剂盒即酶联吸附试验，是一种常用的固相酶免疫测定方法。Engvall 和Perlmann于1971年应用该法进行了IgG定量测定，并命名为"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。
ELISA试剂盒免疫测定的目的：
1.测定体液中的各种蛋白质，包括含量极少的蛋白质如甲胎蛋白等；
2.测定激素，包括小分子量的甾体激素等；
3.测定抗生素和药物；
4.测定病原体抗原，HBsAg、HBeAg等；
5.利用纯化的抗原检测标本中的抗体，例如抗-HBs等；
ELISA的基本原理
①使抗原（或抗体）结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；
②使抗原（或抗体）与某种酶联结成酶标 抗原（或抗体），而且此酶标抗原（或抗体）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；
③测定时将受检标本（抗体或抗原）和酶标抗原（或 抗体）按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应，再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，后结合 在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例；再加入酶反应底物后，底物被酶催化后变为有色产物，根据其颜色反应的 深浅进行定性或定量分析，以了解被测标本中抗体或抗原含量。
ELISA试剂盒实验方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在中 除正常反应外，有时常可见到一些错误结果（即假阳性或假阴性结果）。引起ELISA测定错误结果的原因主要有：①标本因素；②试剂因素；③操作因素。本文就标本因素对ELISA测定的影响做如下讨论。
ELISA试剂盒实验步骤
1.包被；
2.加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)；
3.加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
4.加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟；
5.终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml；
6.结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm处，以空白对照孔调零后测各孔OD值。
血清是ELISA标本，血浆一般可视为与血清同等的标本，标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，分为内源性物质和外源性物质两种。
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