ELISA试剂盒是干什么用的，抗体人源化又该怎么用呢？

ningxueqin · 发表于 2023-4-19 13:27:09

　 ELISA试剂盒是干什么用的，抗体人源化又该怎么用呢？ELISA试剂盒即酶联吸附试验，是一种常用的固相酶免疫测定方法。Engvall 和Perlmann于1971年应用该法进行了IgG定量测定，并命名为"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。
　　ELISA试剂盒免疫测定的目的：
　　1.测定体液中的各种蛋白质，包括含量极少的蛋白质如甲胎蛋白等；
　　2.测定激素，包括小分子量的甾体激素等；
　　3.测定抗生素和药物；
　　4.测定病原体抗原，HBsAg、HBeAg等；
　　5.利用纯化的抗原检测标本中的抗体，例如抗-HBs等；
　　ELISA的基本原理
　　①使抗原（或抗体）结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；
　　②使抗原（或抗体）与某种酶联结成酶标抗原（或抗体），而且此酶标抗原（或抗体）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；
　　③测定时将受检标本（抗体或抗原）和酶标抗原（或抗体）按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应，再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，后结合在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例；再加入酶反应底物后，底物被酶催化后变为有色产物，根据其颜色反应的深浅进行定性或定量分析，以了解被测标本中抗体或抗原含量。
　　ELISA试剂盒实验方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在中除正常反应外，有时常可见到一些错误结果（即假阳性或假阴性结果）。引起ELISA测定错误结果的原因主要有：①标本因素；②试剂因素；③操作因素。本文就标本因素对ELISA测定的影响做如下讨论。
　　ELISA试剂盒实验步骤
　　1.包被；
　　2.加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)；
　　3.加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
　　4.加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟；
　　5.终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml；
　　6.结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm处，以空白对照孔调零后测各孔OD值。
　　血清是ELISA标本，血浆一般可视为与血清同等的标本，标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，分为内源性物质和外源性物质两种。

ELISA试剂盒是干什么用的，抗体人源化又该怎么用呢？

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