慢病毒生产elisa试剂盒夹心法的来由

2223551051 · 发表于 2023-1-10 22:35:00

　　慢病毒生产elisa试剂盒的夹心法，是一种很常规的检测方法。它是怎么样工作的，原理，操作又是如何呢？？
　　1。在检测之前，两种抗体都应该被纯化，并且必须被标记。
　　2。对于大多数应用程序，一个聚氯乙烯（PVC）微孔板是的；然而，参考制造商的指南来决定蛋白质的结合板的zui合适的类型。
　　三。每口井加入约50μL抗体溶液（PBS中的20μg/L），将未标记的抗体与每个井的底部结合。聚氯乙烯将绑定约100纳克/井（300毫微克/平方厘米）。使用的抗体的数量将取决于个别化验，但如果需要zui大结合，使用至少1μg /井。这是远远高于能力的井，但绑定将发生更迅速，并结合溶液可以保存和再次使用
　　4。培养板在4°C允许完整的结合。
　　5。用PBS清洗酶标板两次。500毫升喷瓶方便。抗体溶液冲洗可以把板在合适的容器中删除。
　　6。其余位点的蛋白结合在微孔板必须用封闭液孵育饱和。用3%的威尔斯/ PBS与0.02%叠氮化钠填充到顶部。孵化2小时通宵在室温空气潮湿。
　　注意：叠氮化钠是一种抑制剂或辣根过氧化物酶。如果HRP标记的抗体将用于检测，不包括叠氮化钠在缓冲液或洗涤溶液中。
　　7。用PBS清洗酶标板两次。
　　8。添加50μL抗原解酶标板（抗原溶液应滴定）。所有的稀释液应在缓冲完成（3%牛血清白蛋白/ PBS）。放置至少2小时，在潮湿空气中室温
　　9。用PBS洗盘子四次。
　　10、添加标记的第二抗体。在初步实验中可以确定添加量。为了准确定量，第二抗体应过量使用。所有的稀释液应在缓冲了。
　　11。潜伏在潮湿的气氛中室温2小时或更多。
　　12、用PBS的几种变化清洗。
　　13、添加基材如制造商指示。经过建议的孵育时间已经过去，在目标波长的光学密度，可以测量在ELISA板阅读器。
　　注意：由于潜在致癌性，一些酶底物被认为是有害的。妥善处理，并参考材料安全数据表，以妥善处理预防措施。

慢病毒生产elisa试剂盒夹心法的来由

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