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ningxueqin 发表于 2023-1-9 21:07:20
抗体药物研发性激素放免检测试剂盒使用说明
1.样品测定的准备：（注意：样品裂解需在4℃或冰上操作）
对于贴壁细胞：
吸除培养液，按照6孔板每孔加入200微升裂解液的比例（即相当于细胞培养液量2毫升的1/10）加入裂解液，裂解细胞。裂解细胞时为了裂解充分，可以使用移液器进行反复吹打或晃动培养板使裂解液充分接触并裂解细胞。通常细胞在接触裂解液后会立即裂解。裂解后4℃12000g离心5-10分钟，取上清，用于后续的测定。
对于悬浮细胞：
用离心管离心沉淀细胞，弃上清，轻轻弹散细胞，按照6孔板每孔的细胞量加入200微升裂解液的比例加入裂解液，裂解细胞。裂解细胞时为了裂解充分可以弹击离心管管底或适当Vortex使裂解液充分接触并裂解细胞。通常细胞在接触裂解液后会立即裂解。裂解后4℃12000g离心5-10分钟，取上清，用于后续的测定。
对于组织样品：
按照每20毫克组织加入约100-200微升裂解液的比例加入裂解液，然后用玻璃匀浆器或其它匀浆器进行匀浆。充分匀浆可以确保组织被*裂解。裂解后4℃12000g离心5-10分钟，取上清，用于后续的测定。
2.标准曲线测定的准备：
冰浴上溶解待用试剂，把ATP标准溶液用ATP检测裂解液稀释成适当的浓度梯度。具体的浓度需根据样品中ATP的浓度而定。初次检测可以检测0.1、1和10微摩尔/升这几个浓度，在后续的实验中更据样品中ATP的浓度对标准品的浓度进行适当调节。
3.ATP检测工作液的配制：
按照每个样品或标准品需100微升ATP检测工作液的比例配制适当量的ATP检测工作液。把待用试剂在冰浴上溶解。取适当量的ATP检测试剂，按照1:100的比例用ATP检测试剂稀释液稀释ATP检测试剂。例如50微升ATP检测试剂可以加入5毫升ATP检测试剂稀释液配制成5毫升ATP检测工作液。稀释后的ATP检测试剂即为用于后续实验的ATP检测工作液。ATP检测工作液可在冰浴上暂时保存。
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