抗体药物研发流程图抗体纯化—不含Protein A的两步纯化法

492482092 · 发表于 2022-12-14 16:14:46

　　生物制药纯化工艺开发了纯化工艺方案以纯化治疗用单克隆抗体。经典的抗体纯化方法是使用Protein A亲和层析大量捕获细胞上清中的抗体之后，再使用其他层析方法去除抗体中的杂质。现在，我们给大家提出另一种方案，抗体药物研发流程图这种方案不使用亲和层析这一经典步骤，它使用了两根可互换的色谱步骤和非亲和性层析方法。这种纯化方案包括阳离子交换柱（CEX）和疏水电荷诱导（HCI）柱，并且无需进行过程中的过滤步骤。由于HCl层析介质具有去除各种不确定杂质的能力，因此该方案的病毒清除效率很高。该方案的规模可以比经典方法扩大1000到10000倍，并且保持各种抗体的平均总回收率＞70％。此纯化工艺过程中污染物的去除和产品质量与经典的亲和三步层析方法的相关杂质、产品质量相当。
　　蛋白质大规模纯化的经济性很重要，特别是对于治疗用抗体，治疗用抗体的使用量相对于其他生物制品来说是比较大的，一般都在100mg左右的级别。抗体占市场上治疗性生物制剂的很大比例，约占重组蛋白产品销售总额的30％。基于抗体疗法相关的纯化成本往往特别高，因为纯化是开发，生产需要许多昂贵的层析介质。通常，抗体每剂需要较高的剂量，纯化方案对最终产品质量和工艺经济性都非常重要，因为仅纯化就可占下游加工成本的三分之二。当产品是单克隆抗体时，亲和捕获层析柱（如蛋白质A）的介质成本可能会超过其他原材料的成本。
　　尽管开发了在高流速情况下，层析介质的载量也有所提高的改进性能的高级层析介质，亲和层析法通常仍被用作捕获步骤，以满足纯度、产率和载量的要求。传统上，基于亲和层析的捕获步骤（蛋白质A或G）之后是至少一个或两个其他层析步骤。另外，需要一个或多个过程中的过滤步骤，将制品进行各种处理（调酸碱、过滤、超滤等）才能进行下一步的层析步骤。蛋白质A层析不仅比非亲和介质贵至少四到五倍，而且还可能存在蛋白A配体的脱落等问题。通常，即使使用亲和层析法，除非穿插了一个或多个精纯步骤，通常也无法获得足够纯度和好的病毒清除率。
　　通过消除下游加工中的特定步骤，可以在保持分子完整性和纯度的同时最大化生产率。我们描述了一种灵活，可互换，非亲和的两步纯化方法，由于其简单性和涉及的纯化步骤数少，与基于亲和层析的方案相比，该方法可以以较低的成本实现，总体回收率高，最终产品质量等同于传统三步层析的方法。
　　我们不仅减少了纯化过程的步骤数量，而且消除了对过程中浓缩或过滤的需求（这意味着更多的开发、优化、放大、清洁和清洁验证以及增加的过程）成本，同时也避免了在纯化过程中潜在的损失和产品质量变化的风险。减少纯化步骤数量将减少过程组件、缓冲液、储液罐和其他设备的数量。最后，两步纯化过程可以很容易地用于许多抗体分子的临床生产中，而对开发成本，时间和资源需求的投入却相对比较少。

抗体药物研发流程图抗体纯化—不含Protein A的两步纯化法

网站推荐 /1