药物申报CAR-T植物elisa试剂盒检测样本的处理方法

**359660243** 发表于 2022-9-20 11:29:29 · **359660243** 发表于 2022-9-20 11:29:29

　　药物申报CAR-T植物elisa试剂盒检测样本的处理方法
　　植物elisa试剂盒检测应用双抗体夹心法测定标本中植物淀粉分支酶SBE水平。用纯化的植物淀粉分支酶SBE抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物淀粉分支酶SBE，再与HRP标记的植物淀粉分支酶SBE抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物淀粉分支酶SBE呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物淀粉分支酶SBE浓度。
　　植物elisa试剂盒检测的操作步骤：
　　1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃；
　　2、设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
　　3、样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加；
　　4、除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min；
　　5、弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次；
　　6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min；
　　7、每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
　　植物elisa试剂盒检测的样本处理：
　　1、血清：使用不含热原和内dusu的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
　　2、血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
　　3、细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
　　4、组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
　　5、保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

药物申报CAR-T植物elisa试剂盒检测样本的处理方法

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